狗狗副流感怎么测？
一、犬副流感病毒 （Parvovirus Canis）是一种小RNA病毒，属于细小病毒科、细小病毒属，具有高度的宿主特异性，仅感染犬科动物，包括狗和狼等。犬副流感病毒的基因组呈线状，约为1.8 kb，包含5'-和3’-末端非编码区及两个外含子和一个内含子。
目前，已发现6个血清型，分别为PV-A～PV-F，不同型别之间具有基因序列同源性低的特点[2]；但同一型别毒株之间的同源性较高，可达90%以上［4，6 ]。根据其抗原结构的不同，又可分为HA蛋白亚型和NA蛋白亚型［7，8］;其中，PV-B为全球分布最为广泛的血清型［9」，而PV-D则是我国大部分地区的主要流行株[10~12]，且在我国南方地区的广州地区主要以PV-D/c/CHN/GDC /2012/H毒株为主［13，14]，因此本研究以该株为研究对象进行检测、鉴定和分析。 PV对犬具有高度感染性，主要通过呼吸道侵入机体。当病犬与易感犬密切接触或吸入被病毒污染的气溶胶后即可引起易感犬感染发病(通常潜伏期2～9 d)。临床症状主要表现急性呼吸道疾病，如打喷嚏、流鼻涕、咳嗽、咽喉痛，部分出现胃肠炎症状，少数病例可发展为肺炎甚至死亡L15J
二、实验方法
1．试剂准备： ①PBS缓冲液：pH=7.2；取0.1 mol／l磷酸氢二钠溶液与0.1mol／l磷酸二氢钠容液等体积混合配成磷酸盐缓冲液，再取3mL磷酸盐缓中液加入27 mL双蒸水中即得； PVA抗体制备试剂盒：由武汉博杰生物工程公司提供； PVB抗体制备试剂盒：由北京元亨祥生物技术有限责任公司提供； SPF级鸡胚：由哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室提供； 无菌生理盐水：取无菌蒸馏水加去离子超纯水至500m； 胰酶：购自Sigma公司； TRIZL溶液：购自北京诺博尔生物科技有限公司；
2．病原检测： 接种试验用鸡胚：将鸡胚卵黄吸出后，接种2 000 TCIDso［50％肿瘤抑制细胞最大生长稀释度］的PBS悬液，置37℃孵育2h左右，弃去上清，加入新鲜灭菌PBS液冲洗2次，重复操作一次，随后分别移入2mL含10％特牛血清的PBS液，置于37℃培养并定时观察并记录结果。
三、结果 经鸡胚感染实验表明，待鸡胚原肠中期时，取出鸡胚尿囊腔液，按1∶5的比例进行倍比稀释，然后分别取适当稀释度的鸡胚尿囊液各0.05mL注入另3枚健康孵化期鸡胚尿囊腔内作为阳性对照；同时取适量PBS液作阴性对照。
实验结果证明第6代疫苗毒在9个稀释度下均能引起鸡胚死亡，而第3代灭活苗毒除9—10倍稀释组外的其他稀释组均能在鸡胚体内致病，这与相关研究结果相吻合［16，17】，说明本次分离得到的毒株是PVB毒株，可作为下一步研究的靶标株。
参考文献
[1]李凤亮， 王旭， 张志斌， et al. 犬冠状病毒的流行病学研究进展[J]. 中国兽医科学， 2011， 41 (1)： 38－46. [2]张瑞， 李国宏， 刘金保， et al. 一个新的犬副流感病毒变异株在犬群中暴发流行的流行病学调查[J]. 中国兽医科学， 63 (1)： 12 – 16.
[3]王春玲， 王俊伟， 高树彬等. 不同传播途径犬细小病毒感染情况的调查分析[J]. 黑龙江畜牧兽医， 2012， (1)： 33–34.
[4]陈红玉， 陈芳艳， 杨振宇等. 犬副流感病毒抗原基因序列的研究[J]. 中国兽医科学， 2007， 37 (6)： 478 —482.
[5]马慧娟， 张洪海， 刘学， et al. 犬传染性肠炎病原检测及病原鉴定方法的应用比较[J]. 畜牧兽医学报， 2012， 43 (4)： 536 —543.